En este estudio, se diseñaron tres sgRNAs específicos (sgRNA139, sgRNA128 y sgRNA109) que apuntan al exón 9 del receptor del gen de prolactina (PRLR) en ganado fetal. La escisión del ADN fue mediada utilizando el sistema CRISPR/Cas9, y se seleccionaron líneas celulares estables. A través de la tecnología de transferencia nuclear de células somáticas, se investigaron sistemáticamente los efectos de diferentes sitios de edición en el desarrollo embrionario. Los resultados mostraron que sgRNA139 exhibió la mayor eficiencia de escisión y reparación del ADN. En términos de indicadores de desarrollo embrionario, sgRNA109 redujo significativamente la tasa de escisión y la tasa de blastocistos (< 0.01), mientras que sgRNA139 no tuvo un efecto significativo en la tasa de escisión (> 0.05). Estos hallazgos confirman que sgRNAs altamente específicos y sus líneas celulares editadas estables, como células donantes, pueden regular significativamente las etapas posteriores del desarrollo embrionario. Este estudio proporciona importantes fundamentos teóricos y orientación práctica para la edición genética y la cría molecular en ganado lechero.