Mejoras para el método de tinción por inmunofluorescencia basado en la fragmentación de tejidos de proteínas de cloroplastos
Autores: Wang, Lulu; Chen, Yajuan; Niu, Di; Tang, Mingdong; An, Jinjie; Xue, Shanshan; Liu, Xiaomin; Gao, Hongbo
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Mejoras para el método de tinción por inmunofluorescencia basado en la fragmentación de tejidos de proteínas de cloroplastos
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Inmunofluorescencia
Método de tinción
Proteínas de cloroplastos
Microscopio confocal
Baja temperatura
FtsZ
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 10
Citaciones: Sin citaciones
La tinción por inmunofluorescencia es un método muy común para el estudio de la localización subcelular de proteínas. Un método de tinción por inmunofluorescencia basado en el corte de tejidos para proteínas de cloroplastos supera la restricción de la pared celular de las plantas, simplifica la operación y utiliza menos materiales experimentales. Aquí proporcionamos algunas mejoras para este método. Encontramos que los tejidos teñidos se pueden observar directamente con un microscopio confocal sin lisis del tejido. Las muestras mantenidas a baja temperatura (0-4 grados C) durante todo el proceso pueden reducir la intensidad de la autofluorescencia de la clorofila y la señal de fondo. Una baja temperatura también es buena para el almacenamiento de la muestra. La señal de fluorescencia de las muestras teñidas puede mantenerse durante varias semanas si se almacenan a -20 grados C. FtsZ es un componente esencial del aparato de división de cloroplastos. Demostramos este método con la tinción por inmunofluorescencia de FtsZ1 en Arabidopsis tipo salvaje y algunos mutantes de división de cloroplastos. También probamos con éxito este método mediante la tinción por inmunofluorescencia de FtsZ1 en muchas otras plantas, incluidas las plantas leñosas. Con estos procedimientos, el rendimiento del método de tinción por inmunofluorescencia basado en el corte de tejidos se mejora aún más.
Descripción
La tinción por inmunofluorescencia es un método muy común para el estudio de la localización subcelular de proteínas. Un método de tinción por inmunofluorescencia basado en el corte de tejidos para proteínas de cloroplastos supera la restricción de la pared celular de las plantas, simplifica la operación y utiliza menos materiales experimentales. Aquí proporcionamos algunas mejoras para este método. Encontramos que los tejidos teñidos se pueden observar directamente con un microscopio confocal sin lisis del tejido. Las muestras mantenidas a baja temperatura (0-4 grados C) durante todo el proceso pueden reducir la intensidad de la autofluorescencia de la clorofila y la señal de fondo. Una baja temperatura también es buena para el almacenamiento de la muestra. La señal de fluorescencia de las muestras teñidas puede mantenerse durante varias semanas si se almacenan a -20 grados C. FtsZ es un componente esencial del aparato de división de cloroplastos. Demostramos este método con la tinción por inmunofluorescencia de FtsZ1 en Arabidopsis tipo salvaje y algunos mutantes de división de cloroplastos. También probamos con éxito este método mediante la tinción por inmunofluorescencia de FtsZ1 en muchas otras plantas, incluidas las plantas leñosas. Con estos procedimientos, el rendimiento del método de tinción por inmunofluorescencia basado en el corte de tejidos se mejora aún más.