El tomate cultivado (L.) es uno de los cultivos hortícolas más importantes del mundo. La optimización de los medios de cultivo para la formación de callos y la regeneración de tejidos de diferentes genotipos de tomate presenta numerosas aplicaciones biotecnológicas. En este trabajo, hemos analizado el efecto de diferentes concentraciones de zeatina y ácido indol-3-acético en la regeneración de explantes de cotiledón en las variedades de tomate M82 y Micro-Tom. Evaluamos parámetros de regeneración como el porcentaje de formación de callos y el área de callo formado, así como el porcentaje de iniciación y el número de brotes adventicios. La mejor combinación de hormonas produjo estructuras similares a brotes después de 2-3 semanas. Observamos la formación de primordios foliares a partir de estas estructuras después de aproximadamente 3-4 semanas. Al transferir los micro-tallos en regeneración a un medio de crecimiento definido, fue posible obtener plantitas completas entre 4 y 6 semanas. Esta combinación de hormonas se aplicó a otros genotipos de tomate, incluyendo variedades comerciales y variedades ancestrales. Nuestro método es adecuado para obtener muchas plantitas de diferentes genotipos de tomate a partir de explantes de cotiledón en un tiempo muy corto, con aplicaciones directas para la transformación de plantas, el uso de técnicas de edición genética y la propagación vegetativa de cultivares élite.