Se desarrolló un protocolo eficiente y reproducible para la transformación genética mediada en mijo kodo (L.) optimizando varios parámetros. Las cepas EHA 105 y LBA 4404 que albergaban los plásmidos pCNL 56 y pCAMBIA 2300, respectivamente, proporcionaron la mayor eficiencia de transformación. La adición de acetosiringona (AS) en el medio de infección (200 uM-EHA 105, 250 uM-LBA 4404) y en el medio de co-cultivo (50 uM) aumentó la eficiencia de la transformación. La expresión transitoria y estable del gen se confirmó con un ensayo histoquímico de embriones infectados y hojas de plantas transformadas, respectivamente. La mejor respuesta de GUS se obtuvo mediante el pretratamiento del callo con una mezcla antinecrótica (10 mg/L de Cys + 5 mg/L de Ag + 2.5 mg/L de As) en un tiempo de infección de 20 min seguido de una co-cultivación durante 3 días (EHA 105) y 5 días (LBA 4404) en oscuridad. Se obtuvieron plantas transgénicas regeneradas después de 8 a 10 semanas de selección en medio de inducción de callo (NAA 0.5 mg/L, BAP 1 mg/L) conteniendo 50 mg/L de Kanamicina + 250 mg/L de Cefotaxima y se enraizaron durante 2 semanas en medio MS conteniendo PAA (1 mg/L) y fitagel. Los plantines establecidos en invernadero mostraron un crecimiento normal. Por lo tanto, el protocolo desarrollado en el presente estudio puede ser utilizado para el desarrollo de variedades mejoradas de mijo kodo.