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Optimización de la Amplificación Isotérmica Mediadas por Bucles para la Detección de la Influenza Aviar

Autores: Glazunova, Anastasia; Sevskikh, Timofey; Kudryashov, Dmitry; Sindryakova, Irina; Kolbasova, Olga; Erokhina, Maria; Mukhin, Andrey; Kolbasov, Denis; Titov, Ilya

Idioma: Inglés

Editor: MDPI

Año: 2025

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Acceso abierto

Artículo científico
2025

Optimización de la Amplificación Isotérmica Mediadas por Bucles para la Detección de la Influenza Aviar


Categoría

Ciencias Agrícolas y Biológicas

Subcategoría

Zootecnia

Palabras clave

Virus de la influenza aviar
RT-LAMP en tiempo real
LAMP colorimétrico
Métodos diagnósticos
Límite de sensibilidad
Pruebas de especificidad

Licencia

CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual

Consultas: 7

Citaciones: Sin citaciones


Descripción
Los virus de la influenza aviar (AIV) representan una amenaza significativa para la salud avícola y la seguridad alimentaria, lo que requiere métodos de diagnóstico rápidos y confiables. Este estudio presenta protocolos optimizados para la detección de AIV utilizando RT-LAMP en tiempo real y LAMP colorimétrico con múltiples indicadores visuales (rojo cresol, verde malaquita, calceína). La validación demostró que LAMP en tiempo real con SYBR Green logró un rendimiento comparable al PCR en tiempo real, con un límite de detección correspondiente a Ct = 38 y una sensibilidad analítica del 100% (IC del 95%: 80-100). El formato LAMP colorimétrico mostró un límite de sensibilidad de 10 copias de plásmido (Ct = 32 en RT-PCR) con una sensibilidad analítica del 91.67% (IC del 95%: 76.1-100). Las pruebas de especificidad confirmaron la amplificación exclusivamente en muestras de AIV (subtipos H1-H12), sin reactividad cruzada con otros virus aviares o controles negativos. Aunque el monitoreo de campo durante el período del estudio no reveló infecciones naturales por AIV, las pruebas paralelas exhaustivas con PCR en tiempo real establecieron una concordancia del 100% en todas las muestras de campo (= 69), confirmando la fiabilidad diagnóstica del método. Los protocolos LAMP optimizados proporcionan un sistema de detección robusto y rápido adecuado para entornos con recursos limitados, permitiendo la identificación temprana de brotes y mejorando las capacidades de vigilancia de AIV sin requerir instrumentación compleja.

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