El oxalato, el ácido dicarboxílico más simple, es un antinutriente prevalente que quelata con varios metales y puede llevar a la formación de cálculos renales en los humanos. La detección precisa de la concentración de oxalato en los alimentos y el cultivo de cultivos de bajo oxalato son importantes para mejorar la salud pública. En este estudio, establecimos una técnica de detección de oxalato de alto rendimiento y alta sensibilidad utilizando cromatografía líquida de ultra alto rendimiento-espectrometría de masas en tándem con trampa de cuádruple (UPLC-QqQ-MS/MS). Además, sobreexpresamos el gen que codifica la oxalil-CoA sintasa en la vía de degradación de oxalato del maíz, resultando en líneas -OE. Al emplear el método UPLC-QqQ-MS/MS para medir los niveles de oxalato en estas líneas transgénicas, observamos que el contenido de oxalato en los granos de las líneas -OE se redujo aproximadamente en un 43%, con un aumento concurrente en algunos micronutrientes como el zinc. Es importante destacar que el maíz transgénico mostró una acumulación normal de compuestos de almacenamiento de semillas u otras características agronómicas. En resumen, desarrollamos un método de detección de alto rendimiento que avanza en la medición de oxalato. Además, al generar un nuevo germoplasma de maíz con oxalato disminuido, nuestro trabajo ofrece posibles ventajas para la salud de los consumidores.