La propagación vegetativa del lúpulo, a pesar de ser un método confiable, no es muy común debido a la falta de material vegetal. En este estudio, se aplicó la técnica de propagación in vitro a la variedad Cascade de L. El material vegetal se recolectó de un campo privado en Sicilia; los explantes fueron sometidos a esterilización antes de la cultura in vitro. Los explantes de un solo nudo se colocaron en cultura in vitro en nueve medios de cultivo diferentes para la multiplicación. Se probaron Thidiazuron (TDZ), Benziladenina (BAP) y meta-Topolina (mT) para la fase de multiplicación. Para la fase de enraizamiento, se evaluaron cinco tipos de medios de cultivo diferentes. Los esquejes binodales provenientes de la prueba de multiplicación anterior se colocaron en la cultura. Los medios de enraizamiento difieren entre sí en la concentración y la relación de dos hormonas auxinas: ácido indol-3-acético (IAA) y ácido indol-3-butírico (IBA). Las plantas enraizadas in vitro obtenidas de la fase de enraizamiento se transfirieron a condiciones ex vitro en una microcaja con agri-perlita y una solución que contenía medio basal de Murashige y Skoog (MS) a mitad de concentración. Con un medio de cultivo que contenía las dosis más altas de TDZ (H6) y combinación con citoquinina (H8 y H9), se obtuvo el mayor porcentaje de brotes. Después de 3 meses de cultivo in vitro, se observó el mayor porcentaje de brotes en el medio de cultivo con 2 mL L de BAP. El mayor porcentaje de enraizamiento, número de raíces y longitud de raíces se encontró cuando el medio de cultivo se suplementó con 1 mL L de IAA. El uso de agri-perlita y MS a mitad de concentración, sin PGR, nos permitió obtener una tasa de supervivencia del 99.1%. Este protocolo de micropropagación es útil para obtener plantas libres de virus y para el desarrollo de la industria cervecera.