El cultivo celular es una excelente alternativa para el mantenimiento de líneas celulares y para obtener preparaciones cromosómicas de calidad de peces. Sin embargo, esta metodología aún se emplea poco, principalmente debido a la dificultad de estandarización de los cultivos celulares. En este estudio, describimos una metodología para la rápida adquisición de linajes celulares y cromosomas mitóticos para estudios citogenéticos de especies de peces a partir de células de tejido muscular. Nuestra metodología se basa en el uso de una película de gelatina, que proporciona una mejor adhesión de un gran número de células y condiciones adecuadas para la multiplicación. Las células de , utilizadas como modelo experimental, con morfología similar a fibroblastos, mostraron una rápida proliferación celular, lo que resultó en un gran número de células. Las preparaciones cromosómicas de células cultivadas mostraron el número diploide de la especie, 2n = 50 cromosomas, en el 80% de las células examinadas, con cromosomas intactos y distendidos. Las poblaciones celulares fueron criopreservadas y, después de ser recuperadas, estas células mantuvieron su capacidad proliferativa. El desarrollo de esta metodología representa una innovación para el área de citogenética de peces y puede aportar una contribución significativa a la conservación y estudio de varios grupos debido a la dificultad de obtener preparaciones cromosómicas de buena calidad.