La mutagénesis es una herramienta importante en la mejora de cultivos y está libre de las restricciones regulatorias impuestas a los organismos genéticamente modificados. La cebada (Hordeum vulgare) es una especie diploide con un genoma más pequeño que el de otros miembros de los cultivos de Triticeae, lo que la convierte en un modelo atractivo para estudios genéticos en cultivos de Triticeae. En este estudio, informamos sobre una población mutagénica con sulfonato de etilo (EMS) en la variedad local de cebada china TX9425, que es tolerante tanto al estrés abiótico como biótico. También se construyó una población de TILLING (Lesión de Locus Inducida en Genomas) que consiste en 2000 líneas M, basada en la enzima CEL I con posterior electroforesis en poliacrilamida, lo que disminuyó el costo y la inversión de mano de obra. Se evaluaron los fenotipos mutantes de las generaciones M y M y se reveló la presencia de un amplio espectro de diversidad morfológica. La población fue evaluada mediante la búsqueda de mutaciones inducidas en cinco genes de interés. Se realizó un análisis detallado para el gen y se identificaron tres mutaciones mediante el cribado en 2000 líneas M. Dos de las tres mutaciones mostraron hojas en mechones y rayas amarillas en comparación con el tipo silvestre. En conjunto, nuestro estudio muestra la eficiencia del cribado y el gran potencial de la nueva población de TILLING para estudios genéticos en el sistema modelo de cultivo de cebada.