Basado en una evaluación sistemática de las características post-descongelación, este estudio categoriza el esperma de jabalí en dos fenotipos de crio-supervivencia distintos: crio-tolerante y crio-sensible. El grupo crio-tolerante mostró una calidad post-descongelación significativamente superior, incluyendo mejor motilidad, integridad de la membrana plasmática, integridad del acrosoma, integridad del ADN y actividad mitocondrial. Además, estos espermatozoides demostraron una mayor capacidad antioxidante y un daño oxidativo reducido (niveles más bajos de MDA). A través de un análisis proteómico, identificamos siete proteínas clave asociadas con la tolerancia al frío (por ejemplo, HSPA12A, PRDX4). La validación funcional reveló que la suplementación del extensor de congelación con 1 ug/mL de proteína recombinante NT5C1B mejoró significativamente múltiples parámetros de calidad en espermatozoides crio-sensibles, confirmando su papel como un factor efectivo en la mejora de la crio-supervivencia. En contraste, la suplementación con proteína ADA no mostró una mejora significativa. El protocolo de congelación bien establecido desarrollado en este estudio proporciona opciones adicionales para la criopreservación del semen de jabalí.