El óxido nítrico (NO) es una molécula de señalización que participa en la adaptación de las plantas a factores ambientales adversos. Este estudio tuvo como objetivo aclarar el papel del NO en la regulación de la H-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) en las raíces de plántulas de pepino cultivadas bajo condiciones de control y estrés por Cd. Además, se ha verificado la relación entre el NO y el ácido salicílico (SA), así como sus interrelaciones con el sulfuro de hidrógeno (HS) y el peróxido de hidrógeno (HO). El efecto del NO sobre la V-ATPasa se estudió analizando dos actividades enzimáticas, el nivel de expresión de genes seleccionados y el nivel de proteína de subunidades seleccionadas de VHA en plantas tratadas con un donante de NO (nitroprusiato de sodio, SNP) y con inhibidores de la biosíntesis de NO (tungstato, WO y éster metílico de N-nitro-L-arginina, L-NAME). Nuestros resultados indican que el NO funciona como un regulador positivo de la V-ATPasa y que esta regulación depende del NO generado por la reductasa de nitratos y la actividad similar a NOS. Se encontró que el mecanismo de acción del NO no está relacionado con cambios en la expresión génica o el nivel de proteína de las subunidades de la V-ATPasa. Los resultados sugieren que en las raíces de pepino, la señalización del NO interactúa con la vía del SA y, en menor medida, con otros dos reguladores conocidos de la V-ATPasa, el HO y el HS.