El amonio (NH) y el nitrato (NO) son las dos formas de nitrógeno inorgánico esenciales para los procesos fisiológicos y bioquímicos en plantas superiores, pero se sabe poco sobre cómo la relación NH:NO puede afectar el metabolismo del nitrógeno. Este estudio determinó el efecto de las relaciones NH:NO en el crecimiento de las plantas, la acumulación y distribución de elementos nutrientes, la calidad de la fruta, la actividad enzimática y la expresión relativa de genes involucrados en el metabolismo del nitrógeno en pimiento (L.). En un experimento en invernadero, las relaciones NH:NO de 0:100, 12.5:87.5, 25:75, 37.5:62.5 y 50:50 se dispusieron en un diseño completamente aleatorio con tres repeticiones. La aplicación de NH:NO en 25:75 resultó en el mayor contenido de materia seca y de N, fósforo (P) y potasio (K). El pimiento tratado con una relación de 25:75 aumentó la longitud de las raíces, la superficie y el volumen de las raíces y las puntas. Los contenidos de vitamina C, azúcar soluble, proteína soluble, fenoles totales, flavonoides y capsaicinoides en las frutas fueron significativamente mayores con la relación NH:NO de 25:75 en comparación con el tratamiento 0:100, mientras que se encontró una disminución en el contenido de nitrato en las relaciones NH:NO de 25:75, 37.5:62.5 y 50:50. La actividad de la enzima glutamina sintetasa (GS), glutamato sintetasas (GOGAT) y los niveles de expresión relativa de genes que codifican estas enzimas fueron superiores cuando se aplicó la relación NH:NO de 25:75. Por lo tanto, una relación adecuada de NH:NO (25:75) en la aplicación de nitrógeno puede estimular el desarrollo de raíces, promover la actividad enzimática y mejorar la productividad y la calidad de la fruta en pimiento.