El fósforo negro (BP), un material bidimensional emergente con propiedades ópticas, termoeléctricas y mecánicas únicas, ha sido propuesto como material bioactivo para la ingeniería de tejidos. Sin embargo, sus efectos tóxicos en los sistemas fisiológicos siguen siendo oscuros. El presente estudio investigó la citotoxicidad del BP en células endoteliales vasculares. Se fabricaron nanosheets de BP (BPNSs) con un diámetro de 230 nm mediante un método clásico de exfoliación en fase líquida. Se utilizaron células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) para determinar la citotoxicidad inducida por los BPNSs (0.31-80 g/mL). Cuando las concentraciones superaron 2.5 g/mL, los BPNSs afectaron negativamente el citoesqueleto y la migración celular. Además, los BPNSs causaron disfunción mitocondrial y generaron especies reactivas de oxígeno intercelular (ROS) excesivas a las concentraciones probadas después de 24 h. Los BPNSs podrían influir en la expresión de genes relacionados con la apoptosis, incluyendo la familia P53 y BCL-2, resultando en la apoptosis de las HUVECs. Por lo tanto, la viabilidad y función de las HUVECs se vieron negativamente influenciadas por la concentración de BPNSs superior a 2.5 g/mL. Estos hallazgos proporcionan información significativa para las aplicaciones potenciales del BP en la ingeniería de tejidos.