Actualmente, las nanopartículas y nanomateriales se utilizan ampliamente para aplicaciones biomédicas. En el presente estudio, se biosintetizaron con éxito nanopartículas de plata (AgNPs) utilizando un extracto libre de células (CFE) de MAE 6 a través de un método verde y ecológico. El tamaño de las AgNPs biosintetizadas fue de 32.7 nm, y su naturaleza cristalina fue confirmada por XRD, de acuerdo con los resultados de caracterización. Se obtuvo un espectro de resonancia de plasmones de superficie de las AgNPs a 420 nm. Las nanopartículas fueron caracterizadas adicionalmente utilizando análisis de DLS y FTIR, que proporcionaron información sobre su tamaño, estabilidad y grupos funcionales. Las AgNPs mostraron menos citotoxicidad contra la línea celular normal Vero [IC = 155 g/mL]. Además, las AgNPs biosintetizadas exhibieron una prometedora actividad antifúngica contra los cuatro más comunes, incluyendo, , , y a concentraciones de 500 g/mL donde las zonas de inhibición fueron de 16, 20, 26 y 19 mm, respectivamente. Además, las CIM de las AgNPs contra , , , y fueron de 125, 62.5, 15.62 y 62.5 g/mL, respectivamente. Además, el estudio ultrastructural confirmó el efecto antifúngico de las AgNPs, donde se perdió la integridad y homogeneidad de la pared celular; la membrana celular se había separado de la pared celular e había invadido el citoplasma. En conclusión, las AgNPs biosintetizadas utilizando un CFE de pueden ser utilizadas como un prometedor agente antifúngico contra especies que causan Aspergilosis.