Antecedentes: El ejercicio induce muchas adaptaciones fisiológicas. Recientemente, se ha propuesto que algunas de estas adaptaciones son inducidas por la producción de lactato mediada por el ejercicio. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar in vitro el efecto del lactato en miotubos cultivados y si los antioxidantes podrían inhibir el efecto. Métodos: Se cultivaron miotubos diferenciados a diferentes concentraciones de L-lactato (0, 10, 30, 50 mM) en ausencia o presencia de un antioxidante, N-acetil-L-cisteína (Nac). También se exploró el efecto temporal de la exposición al lactato en los miotubos. Resultados: Dos horas de exposición a 50 mM de L-lactato y seis horas de exposición a 30 o 50 mM de L-lactato causaron un aumento significativo en la expresión de PGC1-alfa (coactivador 1 alfa del receptor activado por proliferadores de peroxisomas) en los miotubos. Esta regulación ascendente fue suprimida por 2 mM de Nac. La exposición intermitente y continua al lactato causó una regulación ascendente similar de PGC1-alfa. Estos resultados sugieren que el aumento en la expresión de PGC1-alfa es mediado por la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) a partir del metabolismo del lactato y que tanto la exposición continua como la intermitente al L-lactato pueden causar la regulación ascendente.