El zacate de ganso ( (L.) Gaertn.) es una de las malezas más agresivas a nivel mundial, compitiendo con los cultivos y reduciendo en gran medida sus rendimientos. El glifosato, un herbicida post-emergente no selectivo de amplio espectro, ha inducido inevitablemente una resistencia severa en muchas malezas debido a su uso intensivo. Además, las estrategias de control dependen de la claridad de los mecanismos de resistencia. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los niveles de resistencia y los posibles mecanismos de resistencia de dos poblaciones de zacate de ganso recolectadas en huertos. Los resultados mostraron que los índices de resistencia de las poblaciones LL y SS fueron de 3.8 y 1.9, respectivamente. Un cambio de un solo nucleótido dio lugar a una mutación Pro106Leu (P106L) en la población LL y la población SS presentaba una sustitución de aminoácidos Pro106Ser (P106S). La expresión en ambas poblaciones fue 2.6 veces mayor que la de la población tipo salvaje. Sin embargo, el número relativo de copias y el contenido de proteína EPSPS en la población LL fueron mayores que los de la población SS, según el análisis de inmunotransferencia y ensayos de inmunoadsorción ligados a enzimas. En general, confirmamos una amplificación con una mutación P106L, lo que resultó en una sobreproducción de esta proteína EPSPS mutada, lo que confirió una resistencia moderada al glifosato. Este estudio detalla un caso de evolución simultánea de mutación y amplificación en malezas con resistencia al glifosato.