La conservación de los recursos genéticos de los árboles viejos es crucial para su papel ecológico, pero es extremadamente difícil, especialmente para las especies de roble que muestran recalcitrancia en los métodos de propagación por semillas y vegetativos. Nuestro estudio tuvo como objetivo evaluar el potencial regenerativo de árboles de diferentes edades (hasta 800 años) durante la micropropagación. También buscamos determinar cómo las condiciones in vitro pueden influir en las respuestas de regeneración in vitro. Ramas lignificadas recolectadas de 67 árboles seleccionados fueron cultivadas ex vitro en macetas de cultivo a 25 grados C para obtener brotes epicórmicos (fuentes de explantes). Los explantes fueron cultivados en un medio de agar suplementado con 0.8 mg L de 6-benzilaminopurina (BAP) durante al menos 21 meses. En un segundo experimento, se probaron dos condiciones diferentes de multiplicación de brotes (inmersión temporal en bioreactor RITA y medio de agar) y dos formulaciones de medio de cultivo (Woody Plant Medium y medio modificado de Quoirin y Lepoivre). Los resultados mostraron que la longitud media de los brotes epicórmicos obtenidos en un cultivo en maceta era función de la edad del donante y era similar entre el grupo de árboles más jóvenes (aproximadamente 20-200 años), y variaba entre los árboles más viejos (aproximadamente 300-800 años). La eficiencia de la multiplicación de brotes in vitro dependía estrictamente del genotipo. Una cultura in vitro sostenible (definida como supervivencia después de 6 meses) solo fue posible para la mitad de los árboles donantes viejos probados, incluso cuando sobrevivieron al primer mes de crecimiento in vitro. Se reportó un aumento mensual continuo en el número de brotes cultivados in vitro en robles más jóvenes y en algunos robles viejos. Encontramos un efecto significativo del sistema de cultivo y de la composición de macro y micronutrientes en el crecimiento de brotes in vitro. Este es el primer informe que demuestra que la cultura in vitro puede aplicarse con éxito a la propagación incluso de robles pedunculados de 800 años.