Replicar las condiciones in vivo es esencial para comprender las respuestas inmunes y medir biomarcadores inmunes en sangre. El muestreo de biomarcadores inmunes en plasma o suero a menudo falla en detectar señales relevantes para enfermedades, posiblemente porque estos marcadores están secuestrados en células inmunes o vesículas extracelulares. Además, los cultivos tradicionales de sangre total utilizando medios externos pueden no imitar con precisión el entorno fisiológico de las células sanguíneas. Para abordar estas limitaciones, desarrollamos una estrategia utilizando lisados de células sanguíneas enteras y sobrenadantes para optimizar la detección de biomarcadores. Además, empleamos métodos de cultivo de sangre total puros, preservando el entorno celular y bioquímico natural para evaluar la sensibilidad a moduladores inmunes, como el lipopolisacárido (LPS). Este enfoque rentable minimiza la variabilidad y los riesgos de contaminación. Utilizando ensayos inmunoquímicos multiplex Luminex, perfilamos biomarcadores inmunes con mayor sensibilidad y eficiencia que los ELISAs tradicionales. Las muestras de sangre de individuos con alto consumo de alcohol validaron nuestro método al evaluar los niveles de biomarcadores antes y después de la estimulación con LPS, proporcionando información sobre las respuestas intracelulares y las vías inflamatorias. Este método mejora nuestra comprensión de los procesos inflamatorios en las células sanguíneas, demostrando las ventajas de los lisados celulares, sobrenadantes y ensayos multiplex avanzados en la investigación inmunológica.