La toxicidad del aluminio (Al) en suelos ácidos representa una limitación significativa para la productividad de los cultivos. En este estudio, encontramos un aumento notable en la expresión de () en las raíces de alfalfa tolerante al Al (WL-525HQ), que nombramos . Ensayos de conversión transitoria de células epidérmicas de hojas de tabaco mostraron que MsDjB4 se dirigió al sistema de membranas, incluyendo el Retículo Endoplásmico (RE), el Golgi y la membrana plasmática. Sobreexpresamos (MsDjB4-OE) y suprimimos (MsDjB4-RNAi) en raíces peludas de alfalfa y encontramos que las líneas MsDjB4-OE exhibieron una tolerancia significativamente mejor al estrés por Al en comparación con las raíces peludas de tipo salvaje y RNAi. Específicamente, las líneas MsDjB4-OE tenían una longitud de raíz más larga, más raíces laterales y un menor contenido de Al en comparación con las líneas de tipo salvaje y RNAi. Además, las líneas MsDjB4-OE mostraron niveles más bajos de peroxidación lipídica y ROS, así como una mayor actividad de las enzimas antioxidantes SOD, CAT y POD en comparación con las líneas de tipo salvaje y RNAi bajo estrés por Al. Además, las líneas MsDjB4-OE tenían un mayor contenido de proteínas solubles en comparación con las líneas de tipo salvaje y RNAi después del tratamiento con Al. Estos hallazgos proporcionan evidencia de que MsDjB4 contribuye a la mejor tolerancia de la alfalfa al estrés por Al al facilitar la síntesis de proteínas y mejorar la capacidad antioxidante.