La hemofilia A (HA) es un trastorno de coagulación sanguínea recesivo ligado al cromosoma X, y aproximadamente el 50% de los pacientes con HA severa son causados por la inversión del intrón 22 (F8I22I). Sin embargo, el modelo de ratón F8I22I no se ha desarrollado a pesar de ser un modelo necesario para desafiar estudios preclínicos. Se desarrolló un modelo de ratón similar al F8I22I humano a través de una inversión consecuente mediante la formación de roturas de doble cadena (DSB) basada en CRISPR/Cas9, y se confirmaron los síntomas clínicos de hemofilia severa. El ratón F8I22I mostró inversión de un segmento de 391 kb y truncamiento de la transcripción de ARNm en el gen. Además, el ratón F8I22I mostró una deficiencia de actividad de FVIII (10.9 vs. 0 ng/mL en WT y F8I22I, < 0.0001) y un fenotipo de trastorno de coagulación severo en el tiempo de tromboplastina parcial activada (38 vs. 480 s, < 0.0001), en la prueba de sangrado in vivo (pérdida de sangre/peso corporal; 0.4 vs. 2.1%, < 0.0001) y en ensayos de trombograma automatizado calibrado (pico de generación de trombina, 183 vs. 21.5 nM, = 0.0012). Además, se observaron cambios histológicos relacionados con sangrado espontáneo en el hígado, el bazo y los pulmones. Presentamos un nuevo modelo de ratón HA que imita el F8I22I humano. Con una similitud estructural con el F8I22I humano, el modelo de ratón F8I22I será aplicable a la evaluación de medicamentos generales para la hemofilia y al desarrollo de investigaciones sobre terapia basada en edición genética.