La investigación sobre la esteatosis hepática en la ganadería ha sido un área prominente de estudio. Desarrollar un modelo celular de esteatosis in vitro apropiado es crucial para investigar de manera integral los mecanismos involucrados en la deposición de lípidos en el hígado de las aves y para identificar posibles intervenciones que aborden las anomalías en el metabolismo de lípidos. La investigación sobre los métodos de esteatosis hepática in vitro en pollos, particularmente los efectos de diferentes mezclas de grasas, aún es escasa. En este estudio, se utilizaron células LMH para investigar los efectos de OA, SO, PA, SP y sus combinaciones por pares en el desarrollo de esteatosis, con el objetivo de identificar las condiciones óptimas para inducir la esteatosis. El análisis del contenido de triglicéridos (TG) en las células LMH reveló que OA y SP tenían una eficacia limitada para aumentar el contenido de TG, mientras que una combinación de SO y PA en una proporción de 1:2 exhibió el mayor contenido de TG. Además, los resultados de la tinción con Oil Red O en las células LMH demostraron que el tratamiento combinado tuvo un efecto de inducción más pronunciado en comparación con 0.375 mM SO. Adicionalmente, el análisis de RNA-seq mostró que 0.375 mM SO influyó significativamente en la expresión de genes asociados con el metabolismo de ácidos grasos en comparación con el grupo de control, mientras que la combinación de SO y PA condujo a un enriquecimiento de términos clave de GO asociados con la muerte celular programada. Estos hallazgos sugieren que las diferentes condiciones de esteatosis celular podrían llevar a interrupciones distintas en la expresión génica. Las condiciones óptimas para inducir esteatosis en células LMH también se probaron en células hepáticas embrionarias de pollo y embriones. La detección de TG y los ensayos de tinción con Oil Red O mostraron que la combinación de SO y PA indujo con éxito la esteatosis. Sin embargo, el patrón de expresión génica difería del de las células LMH. Este estudio sienta las bases para futuras investigaciones sobre la esteatosis hepática aviar.