La leche de vaca posee un alto valor nutricional debido a su rica variedad de ácidos grasos beneficiosos. Es importante entender los mecanismos involucrados en el metabolismo de lípidos en las vacas lecheras. Estos mecanismos son impulsados por una compleja red reguladora molecular. Además, hay muchos factores regulatorios involucrados en el proceso de metabolismo de ácidos grasos, incluyendo factores de transcripción y ARN no codificantes, entre otros. Los microARN (miARN) pueden regular la expresión de genes objetivo y modular varios procesos biológicos, incluyendo el metabolismo de lípidos. Específicamente, se ha informado que el miR-206 perjudica la acumulación de lípidos en hepatocitos no rumiantes. Sin embargo, los efectos y mecanismos regulatorios del miR-206 sobre el metabolismo de lípidos en células mamarias bovinas siguen siendo poco claros. En el presente estudio, investigamos los efectos del miR-206 sobre genes relacionados con lípidos y la acumulación de TAG. El gen objetivo directo del miR-206 se determinó posteriormente a través de un ensayo de dual-luciferasa. Finalmente, se examinó el contenido de ácidos grasos de las células epiteliales mamarias bovinas (BMECs) tras la inhibición. Los resultados revelaron que la sobreexpresión de miR-206 disminuyó significativamente la concentración de triacilglicerol (TAG) y las abundancias de los siguientes: acetil-coenzima A carboxilasa alfa; sintasa de ácidos grasos; factor de transcripción de unión a elemento regulador de esteroles 1; diacilglicerol aciltransferasa 1; O-aciltransferasa 1-acilglicerol-3-fosfato 6; lipina 1; y elongasa de ácidos grasos 6. La sobreexpresión de miR-206 también se asoció con un aumento en la fosfolipasa similar a patatina dominio que contiene 2, mientras que la inhibición de miR-206 promovió el metabolismo de grasa de leche in vitro. Además, encontramos que es un gen objetivo directo del miR-206 a través de la mutación del sitio de unión. Además, la intervención disminuyó significativamente los niveles de TAG y los índices de elongación de C16:0 y C16:1n-7 en BMECs. Finalmente, el siARN alivió parcialmente la acumulación de TAG aumentada causada por la inhibición de miR-206. En resumen, encontramos que el miR-206 inhibe la síntesis de ácidos grasos de la leche y la acumulación de lípidos al dirigirse a en BMECs. Los resultados presentados en este artículo pueden contribuir al desarrollo de estrategias para mejorar la calidad de la leche de vaca y sus ácidos grasos beneficiosos, desde la perspectiva de las redes miARN-mARN.