El propósito de este estudio es fabricar diferentes microesferas de quitosano eluidas con fármacos anticancerígenos para la terapia combinada del osteosarcoma. En este estudio, se utilizó la electrospray en combinación con nitrógeno líquido a temperatura ambiente para fabricar las microesferas. El tamaño de las microesferas de quitosano obtenidas fue uniforme, y el diámetro promedio fue de 532 m. La tasa de liberación del fármaco modelo y la tasa de biodegradación de las microesferas de quitosano podían ser controladas por el tiempo de entrecruzamiento con vapor de glutaraldehído. Luego se prepararon microesferas de quitosano eluidas con 5-fluorouracilo (5-FU), paclitaxel (PTX) y cis-diclorodiaminoplatino (CDDP), y se seleccionaron dos líneas celulares de osteosarcoma, a saber, HOS y MG-63, como modelos celulares para la demostración in vitro. Encontramos que las microesferas de 5-FU, las microesferas de PTX y las microesferas de CDDP podían inhibir significativamente el crecimiento y la migración de ambas células HOS y MG-63. La apoptosis de ambas células tratadas con microesferas de 5-FU, microesferas de PTX y microesferas de CDDP se incrementó significativamente en comparación con los grupos de control y en blanco. Las microesferas de quitosano eluidas con fármacos anticancerígenos muestran un gran potencial para el tratamiento del osteosarcoma.