Numerosos posibles objetivos farmacológicos, incluidos los receptores acoplados a proteínas G y las proteínas de canales iónicos, residen en la superficie celular como proteínas de membrana de múltiples pasos. Desafortunadamente, a pesar de los avances en tecnologías de ingeniería, la ingeniería de biológicos contra proteínas de membrana de múltiples pasos sigue siendo una tarea formidable. En esta revisión, nos enfocamos en los diferentes métodos utilizados para preparar/presentar proteínas transmembrana de múltiples pasos para la ingeniería de biológicos específicos para objetivos como anticuerpos, nanocuerpos y proteínas sintéticas de andamiaje. Los biológicos diseñados muestran alta especificidad y afinidad, y tienen amplias aplicaciones como terapéuticos, sondas para tinción celular y chaperonas para promover la cristalización de proteínas. Principalmente cubrimos publicaciones sobre este tema de los últimos 10 años, con un enfoque en los diferentes formatos de proteínas transmembrana de múltiples pasos. Finalmente, se discuten los desafíos restantes que enfrenta este campo y las nuevas tecnologías desarrolladas para superar una serie de obstáculos.