Método simplificado para la transformación genética mediada por - de x K. Koch
Autores: Pavlichenko, Vasiliy V.; Protopopova, Marina V.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
Método simplificado para la transformación genética mediada por - de x K. Koch
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Rápido avance
Tecnologías genéticas
Técnicas de edición génica
Especies de álamos
Transformación genética
Líneas transgénicas
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 19
Citaciones: Sin citaciones
El rápido avance de las tecnologías genéticas ha hecho posible modificar diversas plantas a través de la transformación genética y técnicas de edición génica. El álamo, con su rápido crecimiento y regeneración que permite altas tasas de micropropagación, ha surgido como un sistema modelo para la transformación genética de plantas leñosas. En este estudio, K. Koch (álamo de Berlín) fue elegido como organismo modelo debido a sus hojas estrechas y corona en forma de huso, lo que lo hace muy adecuado para manipulaciones. Hasta la fecha, se han desarrollado varios protocolos para la transformación mediada de especies de álamo. Sin embargo, los procedimientos de transformación genética a menudo se ven limitados por la complejidad de los medios nutrientes utilizados para la regeneración y crecimiento de las plantas, lo que podría simplificarse. Nuestro estudio presenta un protocolo más barato, simplificado y relativamente rápido para la transformación mediada de álamos de Berlín. El protocolo implicó el uso de secciones de entrenudos sin yemas axilares como explantes, que fueron cocultivados en gotas de 10 uL de suspensión bacteriana directamente en la superficie de un medio sólido a base de agar sin enjuague y secado en papel estéril después de la inoculación. Utilizamos solo un medio de regeneración basado en Murashige y Skoog suplementado con BA (0,2 mg·L), TDZ (0,02 mg·L) y NAA (0,01 mg·L). La acetosiringona no se utilizó como agente inductor de genes durante la transformación genética. Aplicando nuestro protocolo y utilizando el plásmido binario pBI121 que lleva los genes selectivos y reporteros, obtuvimos seis líneas transgénicas de álamo. La transgénesis se confirmó mediante un tamizaje basado en PCR de regenerantes seleccionados con kanamicina para la presencia de ambos genes mencionados, secuenciación de Sanger y pruebas para detectar la actividad mantenida de ambos genes. La eficiencia de transformación, considerando los 100 explantes tomados originalmente, fue del 6%.
Descripción
El rápido avance de las tecnologías genéticas ha hecho posible modificar diversas plantas a través de la transformación genética y técnicas de edición génica. El álamo, con su rápido crecimiento y regeneración que permite altas tasas de micropropagación, ha surgido como un sistema modelo para la transformación genética de plantas leñosas. En este estudio, K. Koch (álamo de Berlín) fue elegido como organismo modelo debido a sus hojas estrechas y corona en forma de huso, lo que lo hace muy adecuado para manipulaciones. Hasta la fecha, se han desarrollado varios protocolos para la transformación mediada de especies de álamo. Sin embargo, los procedimientos de transformación genética a menudo se ven limitados por la complejidad de los medios nutrientes utilizados para la regeneración y crecimiento de las plantas, lo que podría simplificarse. Nuestro estudio presenta un protocolo más barato, simplificado y relativamente rápido para la transformación mediada de álamos de Berlín. El protocolo implicó el uso de secciones de entrenudos sin yemas axilares como explantes, que fueron cocultivados en gotas de 10 uL de suspensión bacteriana directamente en la superficie de un medio sólido a base de agar sin enjuague y secado en papel estéril después de la inoculación. Utilizamos solo un medio de regeneración basado en Murashige y Skoog suplementado con BA (0,2 mg·L), TDZ (0,02 mg·L) y NAA (0,01 mg·L). La acetosiringona no se utilizó como agente inductor de genes durante la transformación genética. Aplicando nuestro protocolo y utilizando el plásmido binario pBI121 que lleva los genes selectivos y reporteros, obtuvimos seis líneas transgénicas de álamo. La transgénesis se confirmó mediante un tamizaje basado en PCR de regenerantes seleccionados con kanamicina para la presencia de ambos genes mencionados, secuenciación de Sanger y pruebas para detectar la actividad mantenida de ambos genes. La eficiencia de transformación, considerando los 100 explantes tomados originalmente, fue del 6%.