Establecimiento de un método rápido y eficiente para la detección del reovirus aviar basado en la tecnología RT-RAA-CRISPR/Cas12a
Autores: Zheng, Qi; Lu, Zhiyuan; Chen, Huahua; Li, Muzi; Zhang, Haoyi; Cheng, Ziqiang; Liu, Jianzhu
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2025
Acceso abierto
Artículo científico
2025
Establecimiento de un método rápido y eficiente para la detección del reovirus aviar basado en la tecnología RT-RAA-CRISPR/Cas12a
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Reovirus aviar
Rt-raa
Crispr/cas12a
Sensibilidad
Especificidad
Diagnóstico en el lugar
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 9
Citaciones: Sin citaciones
El reovirus aviar (ARV), un agente altamente patógeno en aves de corral, causa graves pérdidas económicas a través de la inmunosupresión y las infecciones secundarias. Los métodos de diagnóstico tradicionales como la PCR cuantitativa por transcripción inversa (RT-qPCR) y el ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) enfrentan limitaciones en entornos con recursos limitados debido a la dependencia de equipos y al procesamiento prolongado. Para abordar esto, desarrollamos un método de detección rápido y portátil que integra la amplificación asistida por recombinasa de transcripción inversa (RT-RAA) con CRISPR/Cas12a. Al dirigirse a la región codificante P17 conservada del gen S1 del ARV, este ensayo amplifica el ARN viral isotérmicamente (37 grados C) en 20 minutos, seguido de la escisión colateral mediada por Cas12a de reporteros fluorescentes o de flujo lateral para una lectura visual. El método logró una sensibilidad de 1 copia/L, superando a la RT-qPCR (10 copias/L), y completó la detección en 40 minutos. Las pruebas de especificidad contra patógenos no objetivo confirmaron cero reactividad cruzada. Utilizando un incubador portátil y herramientas visuales de bajo costo, esta plataforma elimina la dependencia de termocicladores y personal capacitado. Su diseño desplegable en campo permite el diagnóstico in situ, facilitando la detección temprana del ARV para mitigar brotes y pérdidas económicas en la avicultura. Este estudio proporciona un cambio de paradigma en la vigilancia de patógenos aviares, combinando velocidad, sensibilidad y accesibilidad para aplicaciones agrícolas y de salud pública a nivel global.
Descripción
El reovirus aviar (ARV), un agente altamente patógeno en aves de corral, causa graves pérdidas económicas a través de la inmunosupresión y las infecciones secundarias. Los métodos de diagnóstico tradicionales como la PCR cuantitativa por transcripción inversa (RT-qPCR) y el ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) enfrentan limitaciones en entornos con recursos limitados debido a la dependencia de equipos y al procesamiento prolongado. Para abordar esto, desarrollamos un método de detección rápido y portátil que integra la amplificación asistida por recombinasa de transcripción inversa (RT-RAA) con CRISPR/Cas12a. Al dirigirse a la región codificante P17 conservada del gen S1 del ARV, este ensayo amplifica el ARN viral isotérmicamente (37 grados C) en 20 minutos, seguido de la escisión colateral mediada por Cas12a de reporteros fluorescentes o de flujo lateral para una lectura visual. El método logró una sensibilidad de 1 copia/L, superando a la RT-qPCR (10 copias/L), y completó la detección en 40 minutos. Las pruebas de especificidad contra patógenos no objetivo confirmaron cero reactividad cruzada. Utilizando un incubador portátil y herramientas visuales de bajo costo, esta plataforma elimina la dependencia de termocicladores y personal capacitado. Su diseño desplegable en campo permite el diagnóstico in situ, facilitando la detección temprana del ARV para mitigar brotes y pérdidas económicas en la avicultura. Este estudio proporciona un cambio de paradigma en la vigilancia de patógenos aviares, combinando velocidad, sensibilidad y accesibilidad para aplicaciones agrícolas y de salud pública a nivel global.