Se estableció y validó un método analítico para la determinación cuantitativa del insecticida spinetoram en algodón y soja utilizando cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS/MS). El spinetoram es la mezcla de dos espinosinas, 3-O-etil-5,6-dihidro espinosina J y 3-O-etil espinosina L. El método implica la extracción con acetato de etilo seguida de una limpieza por extracción en fase sólida dispersiva (dSPE) con amina primaria secundaria (PSA), C y negro de carbono grafitizado (GCB). La cuantificación final de spinetoram se realizó utilizando LC-MS/MS con ionización por electrospray positiva. El método fue reproducible (razón de Horwitz (HorRat) < 0.5 a 25 ng g) y validado mediante el análisis de muestras spiked a 25, 50 y 100 ng g en soja, algodón y suelo. Las recuperaciones de espinosinas fueron superiores al 85% cuando se añadieron en diferentes niveles. Las identidades de las espinosinas se confirmaron utilizando la relación de iones. Se realizó un estudio de disolución en campo en soja y algodón para determinar el destino ambiental del spinetoram, y las muestras se analizaron siguiendo el método analítico propuesto. Ambos isómeros se disipan rápidamente. Se calculó el intervalo de pre-cosecha del spinetoram en diferentes sustratos.