Preactivación del entrecruzamiento: un método eficiente para la inmovilización orientada de anticuerpos
Autores: Schroeder, Barbara; Le Xuan, Hoa; Völzke, Jule L.; Weller, Michael G.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2019
Acceso abierto
Artículo científico
2019
Preactivación del entrecruzamiento: un método eficiente para la inmovilización orientada de anticuerpos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Proteínas
Entrecruzamiento
Inmovilización
Anticuerpos
Orientación
Covalente
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 26
Citaciones: Sin citaciones
La covalentización de proteínas para su inmovilización irreversible en superficies es un método probado y popular. Sin embargo, muchos protocolos conducen a una orientación aleatoria y a la formación de subproductos indefinidos o incluso inactivos. La mayoría de los conceptos para obtener una conjugación o inmovilización más dirigida requieren la modificación recombinante de al menos un socio de unión, lo cual a menudo es poco práctico o prohibitivamente caro. Aquí se presenta un método novedoso, que se basa en la preactivación química de la Proteína A o G con ciertos covalentizadores convencionales seleccionados. En un segundo paso, se añade el anticuerpo, que posteriormente se covalentiza en la parte Fc. Esto conduce a una inmovilización orientada y covalente de la inmunoglobulina con un rendimiento muy alto. Se presentan protocolos para Proteína A y Proteína G con IgG murina y humana. Este método puede ser útil para la preparación de columnas para cromatografía de afinidad, inmunoprecipitación, anticuerpos conjugados a partículas magnéticas, inmovilización permanente y orientada de anticuerpos en sistemas de biosensores, microarrays, placas de microtitulación u otros sistemas, donde se necesita evitar la pérdida de anticuerpos y se desea una capacidad de unión máxima. Este método es directamente aplicable incluso a anticuerpos en sobrenadantes de cultivos celulares crudos, sueros crudos o preparaciones de anticuerpos estabilizados con proteínas sin necesidad de purificación ni enriquecimiento de la IgG. Este nuevo método proporcionó señales mucho más altas que un método tradicional y, por lo tanto, parece ser preferible en muchas aplicaciones.
Descripción
La covalentización de proteínas para su inmovilización irreversible en superficies es un método probado y popular. Sin embargo, muchos protocolos conducen a una orientación aleatoria y a la formación de subproductos indefinidos o incluso inactivos. La mayoría de los conceptos para obtener una conjugación o inmovilización más dirigida requieren la modificación recombinante de al menos un socio de unión, lo cual a menudo es poco práctico o prohibitivamente caro. Aquí se presenta un método novedoso, que se basa en la preactivación química de la Proteína A o G con ciertos covalentizadores convencionales seleccionados. En un segundo paso, se añade el anticuerpo, que posteriormente se covalentiza en la parte Fc. Esto conduce a una inmovilización orientada y covalente de la inmunoglobulina con un rendimiento muy alto. Se presentan protocolos para Proteína A y Proteína G con IgG murina y humana. Este método puede ser útil para la preparación de columnas para cromatografía de afinidad, inmunoprecipitación, anticuerpos conjugados a partículas magnéticas, inmovilización permanente y orientada de anticuerpos en sistemas de biosensores, microarrays, placas de microtitulación u otros sistemas, donde se necesita evitar la pérdida de anticuerpos y se desea una capacidad de unión máxima. Este método es directamente aplicable incluso a anticuerpos en sobrenadantes de cultivos celulares crudos, sueros crudos o preparaciones de anticuerpos estabilizados con proteínas sin necesidad de purificación ni enriquecimiento de la IgG. Este nuevo método proporcionó señales mucho más altas que un método tradicional y, por lo tanto, parece ser preferible en muchas aplicaciones.