Para los animales salvajes, estar en cautiverio en centros de vida silvestre puede causar un estrés considerable. Por lo tanto, es necesario establecer y validar herramientas no invasivas para medir el estrés crónico durante la rehabilitación. Ocho Buitres Comunes que vivían en crianza permanente fueron colocados individualmente en aviarios preparados y se recogieron sus heces antes, durante y después de un evento estresante para la validación biológica durante un período de siete días. Los metabolitos de glucocorticoides fecales (fGCMs) extraídos fueron analizados con tres ensayos inmunoenzimáticos diferentes (EIA) para encontrar el más adecuado. Además, nuestro objetivo fue investigar la estabilidad de los niveles de fGCM después de la defecación, ya que una mayor metabolización por enzimas bacterianas puede llevar a resultados alterados. El EIA de Cortisona tuvo el mejor rendimiento en machos y hembras y mostró que el evento estresante llevó a un aumento de fGCM del 629% (557% en hembras y 702% en machos) en relación con los valores basales. No encontramos diferencias significativas entre los sexos, pero observamos diferencias significativas entre diferentes momentos del día. La concentración de fGCM cambió significativamente después de ocho horas a temperatura ambiente. Nuestro estudio validó con éxito la medición no invasiva de fGCM como un indicador de estrés en Buitres Comunes y, por lo tanto, podría sentar las bases para futuros estudios que proporcionen nuevos conocimientos para la investigación del bienestar animal en Buitres.