Los promotores de la ARN polimerasa III exógena (pol III) se utilizan comúnmente para expresar ARN de horquilla corta (shARN). Estudios previos han indicado que la expresión de shARN utilizando promotores estándar de pol III puede causar toxicidad in vivo debido a la saturación de la vía nativa de miARN. Una forma potencial de mitigar la toxicidad asociada con shARN es utilizando enzimas nativas de procesamiento de miARN para lograr niveles de expresión de shARN tolerables. Aquí, examinamos el procesamiento paralelo de shARN exógenos aprovechando las enzimas naturales de procesamiento de miARN y posicionando un shARN adyacente al microARN107 (miR107), ubicado en el intrón 5 del gen de la Pantothenate Kinase 1 (PANK1). Desarrollamos un vector que codifica el intrón de PANK1 que contiene miR107 y examinamos la expresión de un solo shARN o múltiples shARNs. Utilizando análisis de qRT-PCR y un ensayo de degradación de transcripción basado en luciferasa, confirmamos que los shARN estructurados con miR30 han dado como resultado la mayor expresión y la posterior degradación de transcripciones. A continuación, inyectamos embriones de pollo en etapas 14-15 de Hamburger y Hamilton con un vector que codifica múltiples shARNs y confirmamos que el procesamiento paralelo no fue tóxico. En conjunto, estos datos proporcionan una estrategia novedosa para aprovechar las vías nativas de procesamiento de miARN para la expresión de shARN. Esto abre nuevas oportunidades para aplicaciones basadas en ARNi en especies animales como los pollos.