El tizón del arroz causado por hongos patógenos es una de las enfermedades más graves en el arroz. La acumulación de genes de resistencia efectivos en variedades de arroz es un enfoque potencial para reducir el daño de la enfermedad del tizón. En este estudio, se introdujeron combinaciones de tres genes de resistencia en una línea de estéril masculino genético termo-sensible (PTGMS) Chuang5S a través de selección asistida por marcadores. Los resultados mostraron que la resistencia al tizón de las líneas mejoradas aumentó significativamente en comparación con Chuang5S, y las líneas de acumulación de tres genes tenían un nivel de resistencia al tizón del arroz más alto que la línea monogénica y las líneas digénicas. Los antecedentes genéticos de las líneas mejoradas eran altamente similares (>90%) al padre recurrente Chuang5S utilizando el chip SNP RICE10K. Además, la evaluación de rasgos agronómicos también mostró que las líneas de acumulación con dos o tres genes eran similares a Chuang5S. Los rendimientos de los híbridos desarrollados a partir de líneas PTGMS mejoradas y Chuang5S no son significativamente diferentes. Las nuevas líneas PTGMS desarrolladas pueden ser utilizadas prácticamente para la cría de líneas parentales y variedades híbridas con resistencia al tizón de amplio espectro.