es un hongo necrotrófico que causa considerables pérdidas económicas en cultivos comerciales. Los hongos del género exhiben una gran variabilidad morfológica y genética, que va desde aislamientos no esporogénicos y no infectivos hasta aquellos esporogénicos altamente virulentos. Hay un creciente interés en los diferentes aislamientos en términos de sus aplicaciones metodológicas destinadas a obtener una comprensión más profunda de la biología de estas especies fúngicas para un control más eficiente de las infecciones que causan. Este artículo describe una mejora en el protocolo de producción de protoplastos a partir de aislamientos no esporogénicos, resultando en protoplastos viables con capacidad de regeneración. Las mejoras del método consisten en un período de incubación de dos días con tapones de micelio y agitación orbital. Se menciona especialmente nuestra preferencia por la enzima VinoTaste Pro en el tampón KC como reemplazo de Glucanex, ya que mejora la eficacia de la aislamiento de protoplastos en los aislamientos B459 y B371. La metodología descrita aquí ha demostrado ser muy útil para aplicaciones biotecnológicas como transformaciones genéticas mediadas por la herramienta CRISPR/Cas9.