A pesar de que la búsqueda de métodos para mejorar la criopreservación de los espermatozoides caninos ha llevado a una mejora en la calidad post-descongelación, los resultados de fertilización tras la inseminación con semen congelado-descongelado aún no son satisfactorios. En este estudio, nos centramos en la modificación de la fluidez de la membrana de los espermatozoides e investigamos si los parámetros cinemáticos, evaluados mediante un analizador de semen asistido por computadora (CASA), pueden mejorarse. El objetivo principal de nuestro estudio fue investigar si el uso de ciclodextrinas cargadas de colesterol (CLC; 0.5 mg, 1 mg, 2 mg) y 2-Hidroxipropil-ß-ciclodextrina (HBCD; 1 mg) influye positivamente en el estado de capacitación, examinado mediante la tirosina-fosforilación, el eflujo de colesterol y el ensayo de unión a la zona (ZBA) de los espermatozoides. El uso de 0.5 mg de CLC aumentó el porcentaje de espermatozoides móviles, progresivos y rápidos en comparación con el control. La adición de HBCD disminuyó la motilidad y la motilidad progresiva de los espermatozoides y la población con movimiento rápido en comparación con el control. El porcentaje de espermatozoides vivos sin eflujo de colesterol en comparación con el control aumentó cuando se utilizó un diluyente con 0.5 mg de CLC. No hubo cambios en el estado de capacitación. La capacidad de unión a la zona de los espermatozoides fue significativamente menor en el grupo con 0.5 mg de CLC que en el control. En conclusión, estos resultados sugieren que la mejora de los parámetros cinemáticos no coincide necesariamente con una mejor capacidad de unión a la zona pelúcida de los espermatozoides.