La sequía es un estrés abiótico importante que limita el crecimiento y rendimiento de la alfalfa, una leguminosa forrajera vital. La metaloproteinasa de la planta Filamentation temperature-sensitive H (FtsH) es una enzima dependiente de ATP y Zn que desempeña un papel significativo en la respuesta de la planta al estrés ambiental. Sin embargo, su función en la resistencia a la sequía sigue siendo en gran medida inexplorada. Este estudio investiga el papel de la tolerancia a la sequía de la alfalfa al analizar el crecimiento, la fisiología y la expresión génica de plantas sobreexpresadas en condiciones de sequía. Los resultados demostraron que tanto las plantas sobreexpresadas como las de alfalfa exhibieron condiciones de crecimiento superiores y una mayor estabilidad de membrana. Las plantas de alfalfa sobreexpresadas también mostraron niveles reducidos de MDA, mayor contenido de prolina, menor acumulación de HO, una actividad aumentada de enzimas relacionadas con antioxidantes (SOD, POD y CAT) y una expresión elevada de genes relacionados con antioxidantes. Estos resultados indicaron que la sobreexpresión mejoró el crecimiento, la regulación osmótica, redujo los niveles de ROS y aumentó la capacidad antioxidante, lo que en última instancia llevó a una mayor tolerancia a la sequía en la alfalfa. Nuestros hallazgos sugieren que mitiga el daño oxidativo causado por la sequía al modular el sistema antioxidante de la planta, mejorando así la tolerancia a la sequía en la alfalfa. Este estudio proporciona una base molecular y genes candidatos para mejorar la resistencia a la sequía en la alfalfa a través de la ingeniería genética.