Las proteínas del virus de la influenza conservadas, como el dominio del tallo de hemaglutinina (HA2), la nucleoproteína (NP) y la proteína de matriz (M), son los principales objetivos en el desarrollo de vacunas universales contra la influenza. Anteriormente, construimos una proteína de vacuna recombinante Flg-HA2-2-4M2ehs que contiene el dominio extracelular de la proteína M2 (M2e) y la secuencia aa76-130 de la segunda subunidad de HA como antígenos objetivo. Demostró inmunogenicidad y una amplia protección contra los virus de la influenza A después de la administración intranasal y parenteral. Este estudio muestra que los epítopos CD8+ de NP, insertados en una proteína fusionada a flagelina que lleva M2e y HA2, afectan la respuesta inmune humoral post-vacunación a los antígenos virales sin reducir la protección. No se encontraron diferencias entre las dos proteínas en su capacidad para estimular la formación de Th foliculares en el bazo, lo que puede contribuir a una respuesta humoral específica de antígeno duradera. Los datos obtenidos en ratones Balb/c sugieren que la inserción de epítopos CTL NP en la proteína fusionada a flagelina que lleva M2e y HA2 reduce la respuesta de anticuerpos a M2e y A/H3N2. En ratones C57Bl6, esto estimula la formación de Tem CD8+ específicos de NP y Tem CD4+ y CD8+ mono y multifuncionales específicos de virus en el bazo y protege completamente a los ratones de los subtipos de virus de influenza A/H1N1pdm09 y A/H3N2.