El sistema CRISPR/Cas9 se ha aplicado ampliamente como una herramienta precisa de edición genética para estudiar las funciones de los genes, así como para mejorar los rasgos agrícolas en varias plantas de cultivo. Aquí, optimizamos un sistema de edición genética en lechuga (L.) utilizando el promotor endógeno y demostramos que el gen es un objetivo versátil. Aislamos el promotor de 10 genes de snRNA identificados en la base de datos del genoma de lechuga para compararlo con el promotor que se ha utilizado para impulsar sgRNAs en lechuga. Se construyeron dos vectores CRISPR/Cas9 utilizando los promotores para impulsar sgRNA361 y dirigirlo al gen. La respuesta de evitación de cloroplastos fue defectuosa en lechugas con mutaciones bialélicas en el gen objetivo, como en el mutante. Las mutaciones genéticas fueron heredables de manera estable desde las generaciones R0 hasta R2, y la alta eficiencia de edición genética permitió la selección de líneas libres de transgenes en la generación R1 y el establecimiento de mutantes independientes en la generación R2. Nuestros resultados sugieren que el promotor es más efectivo que el promotor en impulsar sgRNA para el sistema CRISPR/Cas9 en lechuga y que es un gen objetivo útil para verificar la eficiencia de edición genética sin efectos perjudiciales en el crecimiento de la planta, lo cual es a menudo una consideración en los genes objetivo convencionales.