La leptospirosis es una enfermedad zoonótica de gran preocupación para la salud humana y animal, con animales domésticos, incluidos los perros, actuando como reservorios para la infección humana. La serología se utiliza ampliamente para el diagnóstico de leptospirosis, aunque la prueba estándar de aglutinación microscópica (MAT) utilizando un panel de serovares carece de especificidad y puede llevar a limitaciones en la detección en ciertas regiones. En este estudio, nuestro objetivo fue desarrollar una herramienta de detección de anticuerpos para perros utilizando un ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA) con un conjunto de aislamientos de serovar locales, incluidos Paidjan, Dadas y Mini, para mejorar la precisión de la vigilancia de la leptospirosis en nuestra región. Se evaluaron la especificidad y sensibilidad de varias preparaciones de antígenos, a saber, proteína de célula completa leptospiral (WCP), proteína de membrana total (TMP) y proteína de membrana externa (OMP), utilizando sueros de perros infectados y no infectados, así como sueros negativos de cachorros. El diagnóstico de leptospirosis se apoyó utilizando una prueba de reacción en cadena de la polimerasa específica de género en todos los sueros recolectados. Las preparaciones de proteínas fueron validadas utilizando SDS-PAGE y análisis de Western blot. En los resultados, la MAT estándar no logró detectar anticuerpos en ninguno de los perros confirmados como infectados mediante PCR y aislamiento, destacando sus limitaciones. En contraste, los ELISA basados en OMP utilizando aislamientos locales de serovares dieron resultados positivos con sueros de todos los perros infectados y resultados negativos con sueros de todos los perros de áreas no endémicas. Los títulos de IgG de perros infectados y no vacunados de áreas endémicamente afectadas fueron significativamente más altos que los de las regiones no endémicas. El uso de los ELISA de IgG/OMP con el serovar local Dadas resultó en una mayor especificidad y menor sensibilidad que cuando se utilizaron los ELISA de IgG/WCP y TMP. El análisis de concordancia reveló una concordancia justa y moderada entre los ELISA de IgG/OMP y los resultados de PCR, mientras que se observó una ligera y justa concordancia entre los ELISA de OMP y la MAT. En general, los ELISA de IgG/OMP modificados, utilizando aislamientos de serovar locales relevantes de perros, demostraron una mayor precisión en la detección de leptospirosis en el área de estudio, superando las limitaciones de la MAT. Este estudio destaca la importancia de identificar e incorporar estos aislamientos de serovar circulantes locales en técnicas serológicas para el diagnóstico y vigilancia de la leptospirosis.