Mejorando la Transformación de Maíz y la Mutagénesis Dirigida a Través de la Asistencia de un Vector No Integrante
Autores: Kang, Minjeong; Lee, Keunsub; Ji, Qing; Grosic, Sehiza; Wang, Kan
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Mejorando la Transformación de Maíz y la Mutagénesis Dirigida a Través de la Asistencia de un Vector No Integrante
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Eficiente
Transformación genética
Maíz
CRISPR-Cas9
Libre de transgenes
Edición del genoma
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 10
Citaciones: Sin citaciones
La transformación genética eficiente es un requisito previo para análisis funcionales rápidos de genes y mejoras en rasgos de cultivos. Recientemente demostramos que nuevos vectores binarios de T-DNA con selección de /G418 y un plásmido auxiliar compatible pueden transformar eficientemente el maíz inbred B104 utilizando nuestro método de transformación mediada por -rápido. En este trabajo, implementamos el método de vector T-DNA no integrador () para la transformación mediada por B104 y probamos su potencial para la transformación del inbred resistente B73 y la edición de genes. El método de transformación asistida por vector T-DNA no integrador (NIW) utiliza dos cepas: una que lleva un constructo de gen de interés (GOI) y la otra que proporciona un constructo NIW. Para monitorear la co-integración en el genoma del maíz, combinamos el casete de expresión de maíz impulsado por un fuerte promotor constitutivo con un nuevo marcador visible, que produce el pigmento púrpura betalaina. Como constructo GOI, utilizamos un constructo CRISPR-Cas9 pKL2359 previamente probado para la mutagénesis de genes. Cuando ambos constructos GOI y NIW fueron entregados por la cepa LBA4404Thy-, la frecuencia de transformación de B104 se mejoró significativamente en aproximadamente el doble (10% frente a 18.8%). Es importante destacar que pudimos transformar un inbred resistente B73 utilizando el método de transformación asistida por NIW y obtuvimos tres plantas editadas libres de transgenes al omitir el agente de selección G418. Estos resultados sugieren que la transformación asistida por NIW puede mejorar la frecuencia de transformación del maíz B104 y proporcionar una nueva opción para la tecnología CRISPR para la edición de genomas libres de transgenes.
Descripción
La transformación genética eficiente es un requisito previo para análisis funcionales rápidos de genes y mejoras en rasgos de cultivos. Recientemente demostramos que nuevos vectores binarios de T-DNA con selección de /G418 y un plásmido auxiliar compatible pueden transformar eficientemente el maíz inbred B104 utilizando nuestro método de transformación mediada por -rápido. En este trabajo, implementamos el método de vector T-DNA no integrador () para la transformación mediada por B104 y probamos su potencial para la transformación del inbred resistente B73 y la edición de genes. El método de transformación asistida por vector T-DNA no integrador (NIW) utiliza dos cepas: una que lleva un constructo de gen de interés (GOI) y la otra que proporciona un constructo NIW. Para monitorear la co-integración en el genoma del maíz, combinamos el casete de expresión de maíz impulsado por un fuerte promotor constitutivo con un nuevo marcador visible, que produce el pigmento púrpura betalaina. Como constructo GOI, utilizamos un constructo CRISPR-Cas9 pKL2359 previamente probado para la mutagénesis de genes. Cuando ambos constructos GOI y NIW fueron entregados por la cepa LBA4404Thy-, la frecuencia de transformación de B104 se mejoró significativamente en aproximadamente el doble (10% frente a 18.8%). Es importante destacar que pudimos transformar un inbred resistente B73 utilizando el método de transformación asistida por NIW y obtuvimos tres plantas editadas libres de transgenes al omitir el agente de selección G418. Estos resultados sugieren que la transformación asistida por NIW puede mejorar la frecuencia de transformación del maíz B104 y proporcionar una nueva opción para la tecnología CRISPR para la edición de genomas libres de transgenes.