Aplicación de la ingeniería de plásmidos para mejorar el rendimiento y la calidad de los plásmidos para vacunas y terapia génica
Autores: Folarin, Olusegun; Nesbeth, Darren; Ward, John M.; Keshavarz-Moore, Eli
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2019
Acceso abierto
Artículo científico
2019
Aplicación de la ingeniería de plásmidos para mejorar el rendimiento y la calidad de los plásmidos para vacunas y terapia génica
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
ADN de plásmido
Terapéutico
Superenrollamiento
Bioprocesamiento
Ingeniería
Bacteriófago
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 30
Citaciones: Sin citaciones
Existe un mayor interés en el ADN plasmídico como terapéutica. Esto se evidencia en el número de ensayos clínicos en curso que involucran el uso de ADN plasmídico. Para ser una terapéutica efectiva, se requiere un alto rendimiento y un alto nivel de superenrollamiento. Desde el punto de vista del bioprocesamiento, el nivel de superenrollamiento potencialmente tiene un impacto en la facilidad del procesamiento posterior. Abordamos el cumplimiento de estos requisitos a través de la ingeniería plasmídica. Se desarrolló un plásmido de 7,2 kb mediante la inserción de una secuencia de unión a la girasa fuerte del bacteriófago Mu (Mu-SGS) en un plásmido de 6,8 kb pSVbeta-Gal y se utilizó para transformar cuatro cepas diferentes, y se cultivó para investigar el efecto de Mu-SGS y la dependencia de la cepa. Hubo un aumento de más del 20% en el rendimiento total del plásmido con pSVbeta-Gal398 en dos de las cepas. El contenido de topoisómeros superenrollados aumentó en un 5% en ambas cepas, lo que llevó a un aumento del 27% en el rendimiento general. La extensión del superenrollamiento se examinó utilizando la cuantificación de la densidad superhelical () con pSVbeta-Gal398 manteniendo una densidad superhelical de -0,022, y pSVbeta-Gal -0,019, en ambas cepas. Este estudio ha demostrado que la modificación del plásmido con la secuencia SGS del bacteriófago Mu tiene un efecto beneficioso en mejorar no solo el rendimiento total del plásmido, sino también el contenido de topoisómeros superenrollados del ADN plasmídico terapéutico durante el bioprocesamiento.
Descripción
Existe un mayor interés en el ADN plasmídico como terapéutica. Esto se evidencia en el número de ensayos clínicos en curso que involucran el uso de ADN plasmídico. Para ser una terapéutica efectiva, se requiere un alto rendimiento y un alto nivel de superenrollamiento. Desde el punto de vista del bioprocesamiento, el nivel de superenrollamiento potencialmente tiene un impacto en la facilidad del procesamiento posterior. Abordamos el cumplimiento de estos requisitos a través de la ingeniería plasmídica. Se desarrolló un plásmido de 7,2 kb mediante la inserción de una secuencia de unión a la girasa fuerte del bacteriófago Mu (Mu-SGS) en un plásmido de 6,8 kb pSVbeta-Gal y se utilizó para transformar cuatro cepas diferentes, y se cultivó para investigar el efecto de Mu-SGS y la dependencia de la cepa. Hubo un aumento de más del 20% en el rendimiento total del plásmido con pSVbeta-Gal398 en dos de las cepas. El contenido de topoisómeros superenrollados aumentó en un 5% en ambas cepas, lo que llevó a un aumento del 27% en el rendimiento general. La extensión del superenrollamiento se examinó utilizando la cuantificación de la densidad superhelical () con pSVbeta-Gal398 manteniendo una densidad superhelical de -0,022, y pSVbeta-Gal -0,019, en ambas cepas. Este estudio ha demostrado que la modificación del plásmido con la secuencia SGS del bacteriófago Mu tiene un efecto beneficioso en mejorar no solo el rendimiento total del plásmido, sino también el contenido de topoisómeros superenrollados del ADN plasmídico terapéutico durante el bioprocesamiento.