El Caballo Español de Pura Raza, según nuestra experiencia clínica, se caracteriza por tener un alto número de sementales que no cumplen con las recomendaciones comerciales internacionales para la criopreservación de esperma equino. Esto significa que la inseminación artificial con semen congelado de estos sementales es menos común que en otras razas. En este estudio, investigamos si la incorporación de la centrifugación coloidal en una sola capa antes de la criopreservación en condiciones clínicas podría aumentar el número de eyaculados de sementales de Pura Raza Española aptos para este procesamiento, observando la influencia de la centrifugación y el protocolo de extensor de congelación en la motilidad del esperma post-descongelado. Utilizando la centrifugación coloidal, el porcentaje de eyaculados disponibles para ser congelados aumentó del 35% (6/17) al 71% (12/17), duplicando el número de muestras que podrían haber sido sometidas a criopreservación. Solo encontramos diferencias significativas en linealidad (LIN) y desplazamiento lateral de la cabeza (ALH) después de 5 minutos de incubación a 37 grados C entre las técnicas de procesamiento de centrifugación coloidal y simple. No se encontraron diferencias significativas entre los dos protocolos coloidales diferentes en ninguna de las variables consideradas. La centrifugación coloidal nos permitió obtener, a partir de eyaculados de peor calidad fresca, dosis de esperma descongelado con calidad similar a la de eyaculados de buena calidad. BotuCrio produjo, en general, parámetros de motilidad más altos y sus características que los otros extensores analizados, encontrándose diferencias significativas en comparación con Inra-Freeze y Lac-Edta tanto en motilidad total (MOT) como en motilidad progresiva (PMOT) al utilizar centrifugación coloidal y solo en PMOT al aplicar centrifugación simple. La centrifugación coloidal optimizó la eficiencia de la criopreservación, ya que nos permitió aumentar el número de eyaculados de Caballos Españoles de Pura Raza aptos para ser congelados. Incluir estas técnicas de procesamiento de semen en la prueba de congelación podría ayudar a optimizar los protocolos de criopreservación de esperma equino, especialmente cuando se trata de individuos o razas para las cuales una calidad de esperma inicialmente baja impide o limita su inclusión en programas de criopreservación de esperma.