Este estudio se realizó para determinar la diferencia de temperatura óptima en condiciones de cultivo interior día-noche para mejorar el rendimiento de flores y el contenido de componentes funcionales de plantas de cáñamo hembra. Los clones de cáñamo se cultivaron bajo cinco diferencias de temperatura día y noche (DIF) distintas durante la etapa reproductiva. Los ajustes de temperatura diurna y nocturna fueron los siguientes: 18:30 grados Celsius (DIF negativo 12), 21:27 grados Celsius (DIF negativo 6), 24:24 grados Celsius (DIF 0), 27:21 grados Celsius (DIF positivo 6) y 30:18 grados Celsius (DIF positivo 12). Siete semanas después del trasplante, se analizaron los parámetros de crecimiento, intercambio gaseoso de las hojas, compuestos fenólicos totales, actividad de captación de 2,2-difenilpicrilhidrazilo y contenido de cannabinoides. La biomasa total de brotes basada en peso seco fue mayor a 21:27, alcanzando 41,76 g, y menor a 30:18, midiendo 24,46 g. Sin embargo, la biomasa de flores, que es el sitio de producción principal, fue mayor a 24:24 y menor a 18:30, mostrando una diferencia de 4,7 veces. Los parámetros relacionados con la fotosíntesis dependían de la temperatura y estaban fuertemente correlacionados con la producción de biomasa. El contenido de cannabinoides de las hojas de cáñamo aumentó a 21:27, mientras que el de las flores de cáñamo aumentó a 27:21. Los hallazgos de este estudio indican que la condición de temperatura óptima para la producción de flores de cáñamo hembra en un espacio limitado es el tratamiento de DIF positivo 6, que corresponde a 27:21 grados Celsius. Estos resultados pueden contribuir al avance en la tecnología de cultivo de cultivos de interior.