El impacto del estrés por amonio (NH) en el crecimiento de las plantas varía entre especies y cultivares, lo que requiere una exploración en profundidad de los mecanismos de respuesta subyacentes. Este estudio se adentra en la elucidación de las respuestas fotosintéticas y las diferencias en la tolerancia al estrés por NH al investigar los efectos en dos cultivares de trigo, Xumai25 (menos sensible al NH) y Yangmai20 (sensible al NH). Los cultivares se cultivaron en condiciones hidropónicas con nitrógeno amoniacal (NH, AN) o nitrógeno nitrato (NO, NN) como fuente de nitrógeno. El estrés por NH ejerció un profundo efecto inhibitorio en el crecimiento de plántulas y la fotosíntesis en el trigo. Sin embargo, estos efectos fueron menos pronunciados en Xumai25 que en Yangmai20. El análisis fotosintético dinámico reveló que la supresión en la fotosíntesis se atribuyó principalmente a la limitación estomática asociada con una disminución en el estado hídrico de las hojas y el potencial osmótico. En comparación con Yangmai20, Xumai25 mostró una concentración de K en las hojas significativamente más alta y una regulación al alza, lo que llevó a una apertura estomática más fuerte y, en consecuencia, a un mejor rendimiento fotosintético bajo estrés por NH. En conclusión, nuestro estudio sugirió que la limitación estomática es el factor principal que restringe la fotosíntesis bajo estrés por NH. Además, demostramos que una mejor regulación de las sustancias osmóticas contribuyó a una mayor conductancia estomática y un rendimiento fotosintético mejorado en Xumai25.