El declive en la calidad de la cáscara de huevo de las gallinas ponedoras envejecidas representa un gran desafío económico en la producción avícola. Si bien se ha demostrado que un ciclo de luz ahemérico de 28 horas mejora la calidad de la cáscara de huevo, su mecanismo subyacente sigue siendo incierto. Este estudio asignó aleatoriamente 260 gallinas ponedoras Hy-Line Brown de 74 semanas a dos grupos de ciclos de luz, un grupo de ciclo normal de 24 horas (16L:8D) y un grupo de ciclo ahemérico de 28 horas (16L:12D). Cada tratamiento comprendió 130 gallinas divididas en dos grupos replicados. El ensayo duró 16 semanas. Analizamos sistemáticamente los ritmos circadianos del microbiota intestinal y los metabolitos séricos utilizando secuenciación de 16S rRNA y metabolómica no dirigida. En comparación con el ciclo de 24 horas, el ciclo de 28 horas mejoró significativamente el grosor de la cáscara de huevo en 0.04 mm y 0.02 mm, y la resistencia de la cáscara de huevo en 4.19 N y 4.76 N a las 79 y 84 semanas, respectivamente. Mecanísticamente, el ciclo de luz de 28 horas remodeló los ritmos circadianos del microbiota intestinal, aumentando su riqueza y diversidad, y alteró los patrones rítmicos de los metabolitos séricos. Identificamos nueve géneros microbianos y trescientos setenta metabolitos que exhibieron patrones rítmicos opuestos bajo los dos ciclos de luz. Estos cambios se enriquecieron principalmente en vías relacionadas con el metabolismo de aminoácidos, carbohidratos, lípidos y energía. El análisis de correlación reveló además fuertes asociaciones entre microbios clave y metabolitos funcionales. Promueve la deposición de calcio en las cáscaras de huevo a través de interacciones sinérgicas con quelantes de calcio como el ácido glucónico y el ácido treonina. Mientras tanto, y apoyan sinérgicamente la formación de sustancias de membrana, promoviendo así la proliferación de células epiteliales uterinas y la formación de cáscaras de huevo. Nuestros hallazgos indican que el ciclo de luz ahemérico de 28 horas mejoró la calidad de la cáscara de huevo en gallinas envejecidas al remodelar los ritmos circadianos del microbiota intestinal y los metabolitos, mejorando sinérgicamente la absorción de iones de calcio y la salud del tejido uterino. Esto proporciona una nueva base teórica y dirección práctica para mejorar la calidad del huevo en la fase tardía a través de estrategias de manejo de luz.