Hay un interés creciente en la oxitocina como biomarcador de estrés y bienestar. El objetivo de este estudio fue desarrollar y validar un procedimiento basado en un inmunoensayo altamente sensible para medir la oxitocina en el pelo de los cerdos. Además, se realizó un estudio piloto para aplicar este procedimiento y evaluar posibles cambios en las concentraciones de oxitocina en el pelo durante el ciclo reproductivo de los cerdos en diferentes épocas del año. Este procedimiento utilizó metanol para la extracción de muestras, ya que ofreció mejores recuperaciones que el acetonitrilo, y el inmunoensayo desarrollado fue preciso y exacto para la cuantificación de la oxitocina en el pelo. Cuando se aplicó este procedimiento al pelo recolectado en diferentes momentos del ciclo reproductivo y de la temporada, se encontraron valores más altos en los días 23 y 59 después del parto en el período de invierno-primavera. Además, se encontraron valores más altos de oxitocina en el período de primavera-verano en el pelo recolectado 5 días antes del parto en comparación con el invierno-primavera. La oxitocina en el pelo mostró correlaciones moderadas y bajas con la cortisona y el cortisol en el pelo, respectivamente. Este estudio representa el primer informe en el que se midió la oxitocina en el pelo y podría abrir nuevas líneas para futuras investigaciones sobre la medición de la oxitocina en cerdos y otras especies biológicas como biomarcador de estrés.