Este estudio estandarizó el uso de espectroscopia infrarroja por reflectancia total atenuada-transformada de Fourier (ATR-FTIR) para medir el colesterol en el esperma de cabras machos. El colesterol es un componente de la membrana plasmática del esperma que se elimina durante condiciones tanto fisiológicas (capacitación, para ser fértil) como no fisiológicas (criopreservación). Para esto, se llevaron a cabo tres experimentos: (i) determinación de la concentración adecuada de esperma para detectar colesterol en el espectro FTIR; (ii) determinación del porcentaje mínimo de espermatozoides viables requerido para observar al menos cinco bandas espectrales en común con colesterol puro; (iii) evaluación de la eliminación de colesterol en espermatozoides congelados-descongelados. La concentración más baja de esperma en la que se identificaron claramente las bandas espectrales fue de 13 millones de espermatozoides/mL; en cuanto a la viabilidad, el valor de corte fue del 50%. Cinco áreas de las bandas de colesterol disminuyeron en espermatozoides descongelados en comparación con espermatozoides frescos. En conclusión, FTIR es una técnica útil para cuantificar el eflujo de colesterol en espermatozoides.