Medición simultánea de la cantidad de ADN mitocondrial y la concentración de ATP en óvulos bovinos individuales
Autores: Read, Casey C.; Bhandari, Sadikshya; Moorey, Sarah E.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Medición simultánea de la cantidad de ADN mitocondrial y la concentración de ATP en óvulos bovinos individuales
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Demandante de energía
Ovocitos
Sustratos metabólicos
Números mitocondriales
Concentración de ATP
Número de copias de ADN mitocondrial
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 22
Citaciones: Sin citaciones
Para sostener procesos de desarrollo que requieren mucha energía, los ovocitos deben acumular reservas adecuadas de sustratos metabólicos y números mitocondriales antes de iniciar la maduración. En el pasado, los investigadores han utilizado muestras agrupadas para estudiar el metabolismo ovocitario, y no era posible relacionar múltiples resultados metabólicos en ovocitos individuales, como la concentración de ATP y el número de copias de ADN mitocondrial. Estos escenarios disminuyeron la sensibilidad a las relaciones metabólicas intraovocitarias y dificultaron la obtención de un número adecuado de muestras durante estudios con disponibilidad limitada de ovocitos. Por lo tanto, desarrollamos y validamos procedimientos para medir tanto el número de copias de ADN mitocondrial (mtDNA) como la cantidad de ATP en ovocitos individuales. La validación de nuestros procedimientos reveló que podíamos dividir con éxito lisados de ovocitos en cuartos y medir resultados consistentes de cada uno de los alícuotas tanto para ATP como para el número de copias de mtDNA. El coeficiente de variación entre los valores obtenidos para el número de copias de mtDNA y la cantidad de ATP en los cuádruples fue de 4.72 +/- 0.98 y 1.61 +/- 1.19, respectivamente. Luego utilizamos nuestra metodología para medir simultáneamente el número de copias de mtDNA y la cantidad de ATP en ovocitos en estadio de vesícula germinal (GV) y en metafase dos (MII). Nuestros métodos revelaron un aumento significativo en los niveles de ATP (GV = 628.02 +/- 199.53 pg, MII = 1326.24 +/- 199.86 pg, < 0.001) y el número de copias de mtDNA (GV = 490,799.4 +/- 544,745.9 copias, MII = 1,087,126.9 +/- 902,202.8 copias, = 0.035) en ovocitos en estadio MII en comparación con los de estadio GV. Este hallazgo es consistente con la literatura publicada y proporciona una mayor validación de la precisión de nuestros métodos. La capacidad de producir lecturas consistentes y resultados esperados a partir de alícuotas del lisado de un solo ovocito revela la sensibilidad y viabilidad de utilizar este método.
Descripción
Para sostener procesos de desarrollo que requieren mucha energía, los ovocitos deben acumular reservas adecuadas de sustratos metabólicos y números mitocondriales antes de iniciar la maduración. En el pasado, los investigadores han utilizado muestras agrupadas para estudiar el metabolismo ovocitario, y no era posible relacionar múltiples resultados metabólicos en ovocitos individuales, como la concentración de ATP y el número de copias de ADN mitocondrial. Estos escenarios disminuyeron la sensibilidad a las relaciones metabólicas intraovocitarias y dificultaron la obtención de un número adecuado de muestras durante estudios con disponibilidad limitada de ovocitos. Por lo tanto, desarrollamos y validamos procedimientos para medir tanto el número de copias de ADN mitocondrial (mtDNA) como la cantidad de ATP en ovocitos individuales. La validación de nuestros procedimientos reveló que podíamos dividir con éxito lisados de ovocitos en cuartos y medir resultados consistentes de cada uno de los alícuotas tanto para ATP como para el número de copias de mtDNA. El coeficiente de variación entre los valores obtenidos para el número de copias de mtDNA y la cantidad de ATP en los cuádruples fue de 4.72 +/- 0.98 y 1.61 +/- 1.19, respectivamente. Luego utilizamos nuestra metodología para medir simultáneamente el número de copias de mtDNA y la cantidad de ATP en ovocitos en estadio de vesícula germinal (GV) y en metafase dos (MII). Nuestros métodos revelaron un aumento significativo en los niveles de ATP (GV = 628.02 +/- 199.53 pg, MII = 1326.24 +/- 199.86 pg, < 0.001) y el número de copias de mtDNA (GV = 490,799.4 +/- 544,745.9 copias, MII = 1,087,126.9 +/- 902,202.8 copias, = 0.035) en ovocitos en estadio MII en comparación con los de estadio GV. Este hallazgo es consistente con la literatura publicada y proporciona una mayor validación de la precisión de nuestros métodos. La capacidad de producir lecturas consistentes y resultados esperados a partir de alícuotas del lisado de un solo ovocito revela la sensibilidad y viabilidad de utilizar este método.