La investigación en diversas especies ha demostrado que el factor de transcripción relacionado con doublesex y mab-3, juega un papel fundamental en el desarrollo de los testículos. Sin embargo, los mecanismos moleculares precisos siguen siendo poco claros. En este estudio, investigamos el papel de este factor en el desarrollo testicular utilizando el organismo modelo medaka. Los análisis de SqRT-PCR e ISH revelaron que se expresa predominantemente en los testículos, especialmente en los espermátides y espermatozoides. Utilizando CRISPR/Cas9, generamos dos mutantes homocigotos (-8 bp y -11 bp), que mostraron tasas de fertilización y producción de embriones significativamente reducidas. Además, el número de células germinales y la motilidad de los espermatozoides se redujeron notablemente en los mutantes, manifestándose como síntomas de astenozoospermia y oligozoospermia. Curiosamente, el análisis de RNA-Seq mostró que la deficiencia de este factor podría llevar a una regulación a la baja significativa de numerosos genes relacionados con el desarrollo gonadal y severas disrupciones en la función mitocondrial. Estos resultados sugieren que este factor es esencial para la espermatogénesis y la producción de energía en los espermatozoides. Este artículo proporciona nuevas perspectivas para explorar más a fondo los mecanismos moleculares subyacentes a la espermatogénesis y abordar problemas reproductivos masculinos.