La carne cultivada es un campo de investigación de rápido crecimiento y una industria con un gran potencial para superar las limitaciones de la producción de carne tradicional. La carne cultivada utiliza tecnologías de cultivo celular e ingeniería de tejidos para cultivar un gran número de células in vitro y hacerlas crecer/ensamblarlas en estructuras que imitan los tejidos musculares de los animales de ganado. Las células madre con habilidades de autorrenovación y diferenciación específica de linaje se han considerado una de las principales fuentes celulares para las carnes cultivadas. Sin embargo, el extenso cultivo/expansión in vitro de células madre resulta en una reducción de sus habilidades para proliferar y diferenciarse. La matriz extracelular (MEC) se ha utilizado como un sustrato de cultivo para apoyar la expansión celular en terapias basadas en células en medicina regenerativa debido a su semejanza con el microambiente nativo de las células. En este estudio, se evaluó y caracterizó el efecto de la MEC en la expansión de células estromales del cordón umbilical bovino (CEUB) in vitro. Se aislaron CEUB con potenciales de diferenciación multilinaje del tejido placentario bovino. La MEC descelularizada preparada a partir de una monocapa confluyente de fibroblastos bovinos (FB) está libre de componentes celulares pero contiene proteínas principales de la MEC como la fibronectina y el colágeno tipo I, así como factores de crecimiento asociados a la MEC. La expansión de CEUB en MEC durante tres pasajes (alrededor de tres semanas) resultó en una amplificación de aproximadamente 500 veces, mientras que las células se amplificaron menos de 10 veces cuando se cultivaron en placas de cultivo de tejidos estándar (PCT). Además, la presencia de MEC redujo la necesidad de suero en el medio de cultivo. Es importante destacar que las células amplificadas en MEC retuvieron mejor sus habilidades de diferenciación que las células cultivadas en PCT. Los resultados de nuestro estudio apoyan la noción de que la MEC derivada de células en monocapa puede ser una estrategia para expandir células bovinas in vitro de manera efectiva y eficiente.