El virus del mosaico amarillo del calabacín (ZYMV) representa un patógeno importante de los cultivos. La resistencia al ZYMV en el melón PI 414723 está condicionada por un alelo dominante en el locus. Este acceso resistente restringe la propagación viral y no desarrolla síntomas de mosaico, pero a veces se desarrolla necrosis en respuesta a la inoculación. En estudios anteriores, se ha mapeado en el grupo de ligamiento II del mapa genético del melón. En el presente estudio, se llevó a cabo la clonación posicional del locus, comenzando desde el marcador SSR CM-AG36 a aproximadamente 2 cm de distancia. Utilizamos cinco poblaciones de mapeo que comparten el mismo progenitor resistente, PI 414723, y analizamos un total de 1630 descendientes para construir un mapa genético de alta resolución del locus. Se utilizaron dos bibliotecas BAC de melón para el caminar cromosómico y para desarrollar nuevos marcadores más cercanos al gen de resistencia mediante secuenciación de los extremos de los BAC. Se construyó un contig BAC y se identificó un solo clon BAC, del genotipo susceptible al ZYMV MR-1, que abarca físicamente el gen de resistencia. Se aisló un segundo clon de otro genotipo susceptible, WMR 29, y se secuenciaron y anotaron completamente los dos clones. Marcadores adicionales derivados de la región secuenciada delimitaron la región a 17,6 kb de una secuencia que alberga un factor de transcripción similar a NAC y, dependiendo del genotipo, dos o tres homólogos de genes con una estructura CC-NBS-LRR. El mapeo se confirmó saturando el mapa con marcadores SNP utilizando una sola población de mapeo. La misma región fue amplificada y secuenciada también en el genotipo resistente al ZYMV PI 414723. Debido a que se observaron numerosos sitios polimórficos entre genotipos, no pudimos asociar la resistencia con un polimorfismo específico de ADN; sin embargo, este estudio permite la identificación molecular y allana el camino para estudios funcionales de este locus importante.