La evolución a largo plazo del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) resulta en una alteración sustancial en la patogénesis viral. Los NDV del genotipo VII, un genotipo tardío, muestran un marcado tropismo hacia los tejidos linfoides, especialmente hacia los macrófagos en las gallinas. Sin embargo, el papel de los macrófagos en la patogénesis del NDV del genotipo VII aún no está claro. En este estudio, se investigó la infectividad del NDV en macrófagos y el papel de los macrófagos en la patogénesis del NDV del genotipo VII en gallinas. Informamos que las cepas de NDV del genotipo VII (JS5/05) y IV (Herts/33) pueden replicarse en las células adherentes (predominantemente macrófagos) y no adherentes (predominantemente linfocitos) derivadas de células mononucleares de sangre periférica de gallina (PBMCs), y se detectó una cantidad significativamente mayor de copias del gen del virus en las células adherentes. Además, JS5/05 tuvo una infectividad significativamente mayor en las células adherentes derivadas de PBMC que Herts/33, lo que se correlaciona con su mayor tropismo hacia los macrófagos en el bazo de las gallinas. Curiosamente, la depleción del 68% de macrófagos no tuvo un impacto significativo en los signos clínicos, la mortalidad y la replicación sistemática de JS5/05 en gallinas, lo que puede estar asociado con la contribución de macrófagos no depletados y otras células que apoyan al virus en la replicación del virus. La depleción de macrófagos resultó en una marcada exacerbación del daño tisular y la apoptosis en el bazo causado por JS5/05. Estos hallazgos indicaron que los macrófagos desempeñan un papel crítico en la mitigación del daño tisular causado por el NDV del genotipo VII en gallinas. Nuestros resultados revelaron nuevos roles de los macrófagos en la patogénesis del NDV en gallinas.